b.箭电泳 。在一定电场中,凝胶支持物内的被检物与其相应抗体结合形成的一个个“火箭峰”,火箭峰的高度与其含量成正比,通过测定峰高并与标准比较进行定量测定 。此法操作复杂,临床应用较少 。
c.双向免疫电泳 。通过水平与垂直两个方向进行电泳可将某些分子结构异常的凝血因子进行分离 。
d.酶联免疫吸附试验(ELISA法) 。用酶标抗原或抗体和被检物进行抗原结合反应,经过洗涤除去未结合的抗原或抗体及标本中的干扰物质,留下固定在管壁的抗原抗体复合物,然后加入酶的底物和色原性物质,反应产生有色物质,用酶标仪进行测定,颜色深浅与被检物浓度呈比例关系 。该法灵敏度高,特异强,目前已用于许多止血、血栓成分检测 。
e.免疫比浊法 。将被检物与其相应抗体混合形成复合物,从而产生足够大的沉淀颗粒,通过透射比浊或散射比浊进行测定 。此法操作简便,准确性好,便于自动化 。
全自动血凝仪和半自动血凝分析仪有什么区别(1)结构上不同:目前市售的半自动血凝仪主要由样品、试剂预温槽、加样器、检测系统(光学、磁场)及微机组成 。全自动血凝仪的基本构成包括:样品传送及处理装置、试剂冷藏位、样品及试剂分配系统、检测系统、电子计算机、输出设备及附件等 。
(2)操作方法不同:海力孚血凝仪所采用的检测方法为光电磁珠法,由于仪器的自动化不同,在操作方法上也会存在不同,全自动仪器几乎代替了手工操作,因此应该非常方便,半自动的设备需要人工添加试剂,人工按键操作,操作只需按照仪器使用说明书进行 。
(3)价格不同:半自动和全自动设备在结构和操作上存在很大不同,决定了它们的价格存在较大差异,一半全自动设备多应用在大型医院中,中小型医院通常使用半自动血凝仪,科研机构也常常选择半自动仪器用于教学研究 。
总体来说,半自动与全自动血凝仪都是血凝检测的设备各有各的优点,在选择时,可综合考虑自身单位经济状况和实际所需,选择合适的设备 。
ACL9000全自动凝血分析仪的工作原理1、光路系统
容纳反应盘的区域是检测组件,其内包含一个凝固法通道和一个发色底物法或免疫比浊法通道:
散射比浊法:所有ACL系统均有 。使用660nm波长光散射检测凝固形成 。
发色底物法/免疫比浊法:405nm,检测光吸收 。
2、检测原理
1)散射比浊法(凝固法)检测
散射比浊法(凝固法)检测是指检测和记录血浆样本凝固的时间 。该技术通过检测光散射的变化来确定凝固终点 。
散射比浊法/凝固法,样本和试剂反应时,纤维蛋白原转化为纤维蛋白,光通过该反应介质,从而发生光散射 。660nm光通过血浆,并在900角配备光传感器进行检测光信号 。
纤维蛋白原凝固过程伴随着光散射信号的增强 。随着所检测到的光信号的变化,光电探测器所检测到的电信号也随之变化 。变化的电信号通过软件一系列的数学算法判定凝固终点 。
2)发色底物法(图示:间接发色底物法)
发色底物法可分为直接和间接发色底物法 。
直接法:分析物直接结合在特异性的发色底物上 。比如:蛋白C、纤溶酶原PLG 。
间接法:通过改进的测试体系,加入过量的具有反应活性的酶和能与待测物结合的物质,最后利用特异性合成底物结合剩余的酶,检测其活性,达到检测目的 。比如:肝素、AT-III 。
大多数情况下,在405nm处,通过检测合成底物中的对硝基苯胺(pNA)的吸光度值 。
发色底物法通道利用比色原理检测反应杯中的吸光度变化值 。405nm光源,穿过反应杯,并通过光学感应器进行接收 。反应杯中的吸光度值与pNA的浓度成正比 。光路检测器上接收到的光信号转换为电信号,此电信号与酶的活性成正比 。
3)免疫比浊法
免疫比浊法是指直接检测和记录分析物的浓度 。该方法通过检测光密度值的变化来检测分析物的物理浓度,而并非其活性 。与透射比浊法一样,免疫比浊法依赖抗原抗体复合物的形成,从而检测透光度值的变化 。
ACLTM 8/9/10000系统通过检测405nm通道的光密度值,与参比乳胶液对照得出结果 。
使用405nm波长,通过检测反应杯中的吸光度值(ΔA) 。透过反应杯的光通过光传感器进行检测 。反应杯中液体吸收光信号的多少,直接与抗原抗体复合物的浓度成正比 。光路检测器上接收到的光信号转换为电信号,此电信号与酶的活性成正比 。
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