一文搞清蛋白质相互作用的研究方法 | 实验时间(11)
如果说,之前的实验都是用一把枪,瞄准对面山头的敌人然后各个击破,那么质谱的方法就是拿了一门炮,将对面山头的敌人一网打尽。AP-MS 的方法还有很多变种。
比如利用一些可以对周围蛋白进行生物素标记的酶,我们可以将目标蛋白与这些酶融合表达,那么,在细胞内,这些融合蛋白就可以对目标蛋白附近的所有蛋白打上亲和素的标记,然后通过生物素与亲和素超强的亲和性,我们可以大幅提高 AP-MS 鉴定的灵敏度,在冲洗非特异性结合的时候,我们就不用担心弱相互作用被我们丢失,这类方法叫做邻近标记(proximity labeling)- 质谱法。
狗哥帮助大家把主流的研究蛋白质相互作用的方法都梳理了一遍,从此导师再也不会担心我的课题了,不过关于实验设计,还是需要严谨,对照的设计,实验重现性,bait-prey 的互换等等都需要大家在做实验之前认真探讨和考虑。
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